Desarrollo y estandarización de un ELISA indirecto para la detección de anticuerpos contra el Herpesvirus bovino tipo 1

Resumen

Se desarrolló un ELISA indirecto para el diagnóstico de VHB-1, utilizando un antígeno soluble elaborado con una cepa viral de referencia. Los sueros se emplearon en la dilución 1:64 y como segundo anticuerpo se utilizó un suero comercial anti IgG bovina conjugado con peroxidasa. La reacción fue revelada con Azino-dietilbenzotiazol-sulfonato (ABTS) y agua oxigenada. Se determinó el punto de corte de acuerdo al cociente entre las densidades ópticas de las muestras problema (Cm) y los sueros de referencia. Los resultados fueron comparados con los obtenidos por Virus Neutralización (VN). Se analizaron 587 muestras de suero bovino tomadas al azar, de las cuales 416 resultaron positivas por ELISA y VN, 145 negativas por ambas técnicas y 26 positivas por ELISA y negativas por VN. La sensibilidad y especificidad fue de 100 y 84,79% respectivamente.

Palabras claves: Herpesvirus bovino 1; diagnóstico; ELISA indirecto.

Abstract

An indirect enzyrne linked imrnunosorbent assay (I-ELISA) was developed to detect antibodies to BHV-1 in serun simples. Nonidet P40-solubilized infected with BHV-1 referente strain and mock-infected cell lysates were used as antigens. Serian sarnples were diluted 1: 64 and a commercial horse radish peroxidase-labelled rabbit anti-bovine IgG was used as second antibody. The reaction was developed using azitio-dietilberrzotiazol-sulforrate (ABTS). Cut-off was detemined b)} ratio simple (Rs). Virus neutralization (VN) test was used as a referente test over the 587 sarnples, 416 of thern were positive by VN and I-ELISA, 145 were negative by both techniques, and 26 were positive by I-ELISA and negative b)} VN Using VN as standard, the ELISA showed a relative specifacity and sensibility, of 100 and 84.79%, respectively.

Key Words: Bovine Herpesvirus 1, diagnosis, Indirect ELISA.